08月28 全轉(zhuǎn)錄組主流程任務(wù)投遞說(shuō)明

一、登錄百邁客云平臺(tái)

下載谷歌瀏覽器，輸入網(wǎng)址https://international.biocloud.net/zh/user/login?，進(jìn)入百邁客云平臺(tái)登錄界面，輸入賬號(hào)密碼登錄。賬號(hào)為手機(jī)號(hào)或者是郵箱，初始密碼為123.bmk.

 

二、選擇合適的分析平臺(tái)

百邁客云包含農(nóng)學(xué)和醫(yī)學(xué)兩大類分析平臺(tái)，醫(yī)學(xué)分析平臺(tái)主要針對(duì)人、鼠數(shù)據(jù)的分析，包含：轉(zhuǎn)錄組、非編碼RNA、單基因病外顯子、腫瘤外顯子、重測(cè)序等數(shù)據(jù)分析，以及全轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合分析；農(nóng)學(xué)分析平臺(tái)可以應(yīng)用到更多的物種，涵蓋轉(zhuǎn)錄組、非編碼RNA、微生物、蛋白、代謝等數(shù)據(jù)的分析，以及全轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合分析等。點(diǎn)擊左側(cè)導(dǎo)航分析->農(nóng)學(xué)或者醫(yī)學(xué)打開(kāi)分析平臺(tái)列表頁(yè)面，點(diǎn)擊選擇您想要使用的分析平臺(tái)，打開(kāi)其詳細(xì)介紹頁(yè)面，該頁(yè)面可以看到該平臺(tái)的應(yīng)用領(lǐng)域“平臺(tái)介紹“技術(shù)背景“案例“課堂“版本記錄，點(diǎn)擊打開(kāi)軟件即可進(jìn)入到參數(shù)頁(yè)面。

 

三、創(chuàng)建項(xiàng)目名稱

為了方便數(shù)據(jù)、任務(wù)和報(bào)告的管理，我們將同屬于一個(gè)項(xiàng)目的內(nèi)容會(huì)放到一個(gè)項(xiàng)目中，因此進(jìn)行基本分析時(shí)需要先選擇一個(gè)項(xiàng)目，如果沒(méi)有項(xiàng)目也可以點(diǎn)擊+新建先創(chuàng)建一個(gè)項(xiàng)目，見(jiàn)下圖。

 

四、數(shù)據(jù)導(dǎo)入

針對(duì)FASTQ測(cè)序數(shù)據(jù)，選擇文件夾批量導(dǎo)入，雙端測(cè)序數(shù)據(jù)必須分別以_1.fq和_2.fq結(jié)尾，系統(tǒng)便會(huì)自動(dòng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)，而且多個(gè)目錄中的文件可以分多次導(dǎo)入進(jìn)來(lái)一起進(jìn)行分析。（在本公司進(jìn)行測(cè)序的數(shù)據(jù)會(huì)自動(dòng)推送到您的賬戶下，數(shù)據(jù)所在文件夾名稱為合同編號(hào)）

導(dǎo)入數(shù)據(jù)之后，可以根據(jù)自己的需要修改樣品ID，由于此處設(shè)置的ID會(huì)體現(xiàn)在分析報(bào)告和分析結(jié)果中，因此請(qǐng)慎重考慮后再設(shè)置，分析完成后不可再次修改。如果平臺(tái)上還沒(méi)有您自己的數(shù)據(jù)，請(qǐng)參考數(shù)據(jù)上傳先將您的數(shù)據(jù)傳到云平臺(tái)上。

！注：1.各組學(xué)導(dǎo)入數(shù)據(jù)樣本個(gè)數(shù)要一致

????2.circRNA數(shù)據(jù)選擇去核糖體建庫(kù)則與lncRNA共用一套數(shù)據(jù)，無(wú)需單獨(dú)導(dǎo)入（百邁客建庫(kù)方法為去核糖體建庫(kù)）；選擇去線性建庫(kù)則需要單獨(dú)導(dǎo)入數(shù)據(jù)

 

 

五、選擇樣本對(duì)應(yīng)關(guān)系

為了方便后面的聯(lián)合分析內(nèi)容，需要將各RNA項(xiàng)目里的數(shù)據(jù)按照對(duì)應(yīng)關(guān)系統(tǒng)一編號(hào)，有幾組對(duì)應(yīng)關(guān)系則在左側(cè)添加幾組，再?gòu)挠覀?cè)的lncRNA樣品池和miRNA樣品池中選擇對(duì)應(yīng)的樣本添加到分組。其中默認(rèn)按鈕可以按照數(shù)字的順序快速添加對(duì)應(yīng)關(guān)系。

 

 

六、選擇參考基因組

對(duì)于依賴參考基因組序列進(jìn)行分析的平臺(tái)，一定要選擇和分析數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)的參考物種及組裝版本，不同版本的參考基因組的詳細(xì)信息可以點(diǎn)擊基因組版本詳情進(jìn)行查看。如果云上沒(méi)有您需要的參考基因組，您可以聯(lián)系對(duì)應(yīng)的運(yùn)營(yíng)將您提供的基因組文件部署到云平臺(tái)上，供您使用。（注：一個(gè)項(xiàng)目只能使用一個(gè)版本的參考基因組進(jìn)行分析）

 

 

七、參數(shù)設(shè)置

1. 流程版本號(hào)可以選擇默認(rèn)的最新版本

Lib_type為窗體頂端

2. Lib_type ：lncRNA建庫(kù)方式，fr-firststrand表示測(cè)序數(shù)據(jù)中，reads2方向與轉(zhuǎn)錄本方向一致；fr-unstranded為非鏈特異性建庫(kù)；fr-secondstrand 表示read1方向與轉(zhuǎn)錄本方向一致(百邁客lncRNA的建庫(kù)方式為fr-firststrand）
3. lncRNA分析中反式靶基因預(yù)測(cè)方法： 樣本少的時(shí)候可以選擇基于序列方法，樣本數(shù)較多（大于5）推薦使用基于共表達(dá)分析方法。
4. miRNA的長(zhǎng)度范圍和接頭序列可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行填寫(xiě)，主要是為了過(guò)濾原始數(shù)據(jù)中的街頭，默認(rèn)參數(shù)為百邁客使用的序列
5. circRNA預(yù)測(cè)軟件：給出三種預(yù)測(cè)方法，CIRI和find_circ是兩個(gè)不同的預(yù)測(cè)軟件，可以分別選擇其中一個(gè)軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)，CIRI+find_circ是將兩個(gè)軟件預(yù)測(cè)的結(jié)果取交集作為最終的結(jié)果，（此選項(xiàng)可能會(huì)導(dǎo)致預(yù)測(cè)結(jié)果偏少）

八、差異分組設(shè)置

根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)以及樣品信息，進(jìn)行分組的設(shè)置，流程據(jù)此進(jìn)行差異比較分析，此處只支持兩組間比較，可添加多個(gè)差異分組。

DEseq2軟件適用于有生物學(xué)重復(fù)的項(xiàng)目，edgeR適用于無(wú)生物學(xué)重復(fù)的項(xiàng)目，選擇第一個(gè)，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)識(shí)別項(xiàng)目類型選擇對(duì)應(yīng)的軟件

1. FDR值一般推薦選擇0.01，差異倍數(shù)閾值一般推薦選擇2.（此處設(shè)置的的參數(shù)和差異分組在后期報(bào)告?zhèn)€性化中可再次進(jìn)行修改）

 

九、聯(lián)合分析參數(shù)

1. 構(gòu)建共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的篩選條件為共表達(dá)相關(guān)性閾值和共表達(dá)相關(guān)性分析中顯著性閾值兩個(gè)參數(shù)，其中共表達(dá)相關(guān)性閾值越大，顯著性閾值越小，則條件越嚴(yán)格。
2. 構(gòu)建ceRNA網(wǎng)絡(luò)的關(guān)系對(duì)的篩選條件為ceRNA超幾何檢驗(yàn)fdr值、ceRNA超幾何檢驗(yàn)p值、ceRNA共享的miRNA數(shù)目三個(gè)參數(shù)，其中fdr值和P值越小，共享miRNA數(shù)目越大則篩選條件越嚴(yán)格。
3. 圖中參數(shù)為推薦參數(shù)

 

十、生成標(biāo)準(zhǔn)分析報(bào)告

參數(shù)設(shè)置完成之后，可以點(diǎn)擊保存參數(shù)，方便之后進(jìn)行重新分析或者基于本次參數(shù)進(jìn)行修改后再次分析；一切準(zhǔn)備就緒后，點(diǎn)擊提交將任務(wù)提交到百邁客云計(jì)算集群上，根據(jù)不同分析平臺(tái)、不同數(shù)據(jù)量等待大概2小時(shí)到3周的時(shí)間完成項(xiàng)目分析，獲取到標(biāo)準(zhǔn)分析報(bào)告。

報(bào)告查看，點(diǎn)擊項(xiàng)目（管理）?->?我的項(xiàng)目打開(kāi)項(xiàng)目列表，找到之前提交任務(wù)時(shí)選擇的項(xiàng)目，點(diǎn)擊項(xiàng)目名稱打開(kāi)該項(xiàng)目，即可看到新生成的分析報(bào)告記錄，點(diǎn)擊報(bào)告名稱查看詳細(xì)報(bào)告。

點(diǎn)擊報(bào)告右上角的項(xiàng)目結(jié)果下載，可以選擇下載HTML報(bào)告、PDF報(bào)告和結(jié)果數(shù)據(jù)（尾款結(jié)清后）。HTML報(bào)告只包括分析報(bào)告的html文件及一個(gè)src文件夾，展示了部分結(jié)果；PDF報(bào)告是根據(jù)HTML報(bào)告轉(zhuǎn)換而來(lái)，方便您進(jìn)行報(bào)告打??；結(jié)果數(shù)據(jù)包含了項(xiàng)目中所有結(jié)果文件，一般比較大，會(huì)通過(guò)FTP進(jìn)行下載